Resumen
Fondo
Actualmente, la expresión del ligando de muerte programada 1 (PD-L1) se ha aplicado ampliamente en ensayos clínicos y en la práctica clínica real como biomarcador principal de la eficacia de los inhibidores de puntos de control inmunitarios. El propósito de este estudio es revelar la distribución y la concordancia de la expresión de PD-L1 en una cohorte consecutiva a gran escala de pacientes del este de Asia con cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).
Métodos
La prueba de PD-L1 se realizó mediante ensayos 22C3, y los casos se clasificaron en alta, baja y sin expresión de PD-L1 en función de la puntuación de proporción tumoral (TPS). Se utilizó secuenciación de próxima generación de captura de destino para identificar eventos moleculares.
Resultados
Se inscribieron un total de 4550 pacientes y 4622 pruebas de expresión de PD-L1. Hubo 3017 (66,3 %) pacientes sin expresión de PD-L1 (TPS < 1 %), 1013 (22,3 %) con expresión baja de PD-L1 (TPS 1–49 %), 520 (11,4 %) con expresión alta de PD-L1 expresión (TPS ≥ 50%). Se observaron mayores proporciones de expresión positiva de PD-L1 (TPS ≥ 1 %) en fumadores, hombres, carcinoma de células escamosas y adenocarcinoma de pulmón de alto grado. Análisis posteriores revelaron una concordancia aceptable en lesiones primarias y metastásicas (kappa = 0,533), concordancia deficiente en tumores primarios multifocales (kappa = 0,045) y buena concordancia en muestras de biopsia y resección (kappa = 0,662)/dos muestras de biopsia (kappa = 0,711). Los análisis mutacionales revelaron una asociación entre la alta expresión de PD-L1 (TPS ≥ 50%) y EGFR tipo salvaje, KRAS mutación, ALK reordenamiento, y TP53 mutación.
Conclusión
El estudio revela el patrón de distribución único de la expresión de PD-L1 en una cohorte a gran escala de Asia oriental con NSCLC, la concordancia de múltiples pruebas de PD-L1 y la asociación entre la expresión de PD-L1 y eventos moleculares. Los resultados arrojan luz sobre la optimización de las pruebas de PD-L1 en la práctica clínica.
Introducción
Los inhibidores de puntos de control inmunitarios (ICI) de la proteína de muerte celular programada 1 (PD-1)/ligando de muerte programada 1 (PD-L1) han revolucionado los tratamientos del cáncer de pulmón y han elevado sustancialmente la supervivencia de los pacientes con cáncer de pulmón. Recientemente, se informaron los resultados de cinco años de KEYNOTE-024 [1], y pembrolizumab (inhibidor de PD-1) podría mejorar significativamente la supervivencia general (SG) en un 38 % y la supervivencia libre de progresión (SLP) en un 50 % en pacientes con cáncer de pulmón no pequeño metastásico (NSCLC) con puntuación de proporción tumoral PD-L1 (TPS) ≥ 50% en comparación con la quimioterapia. Mientras tanto, a pesar del beneficio de SG a largo plazo proporcionado por los ICI PD-1/PD-L1, solo el 15-25 % de los pacientes con NSCLC responderán inicialmente en la práctica clínica real [2]. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de encontrar una forma eficaz de identificar subgrupos de pacientes que se beneficiarán de las ICI.
Hay varios biomarcadores predictivos solubles de respuesta a las ICI, como la expresión de PD-L1, la carga de mutación tumoral, la mutación tumoral específica (p. ej., mutaciones en la replicación del ADN o los genes de reparación) y células inmunitarias asociadas al tumor (p. ej., linfocitos T CD8+) [3,4,5]. Aunque imperfecta, la expresión de PD-L1 destaca sobre el resto por su buen rendimiento y viabilidad clínica. Aunque la inmunohistoquímica (IHC) de la expresión de PD-L1 se ha aplicado ampliamente clínicamente [2], aún faltan estudios publicados sobre la prevalencia de la expresión de PD-L1 en una cohorte a gran escala del este de Asia y la concordancia de la expresión de PD-L1 en pacientes con múltiples cánceres de pulmón o pruebas repetidas de PD-L1. Además, los estudios anteriores se centran principalmente en el cáncer de pulmón avanzado mediante el uso de muestras de biopsia, que no podían representar completamente la imagen completa del tumor, lo que generaba desviaciones en los resultados.
En este estudio, informamos la prevalencia en el mundo real y la concordancia de la expresión de PD-L1 utilizando ensayos 22C3 en una cohorte de NSCLC de Asia oriental basada en la población consecutiva, principalmente utilizando muestras quirúrgicas. Nuestro estudio reveló la concordancia de las pruebas de PD-L1 de múltiples biopsias/muestras, así como la asociación entre la expresión de PD-L1 y los factores clinicopatológicos comunes, incluido el estado de mutación genética, que proporcionó información sobre las pruebas de PD-L1 para pacientes con NSCLC.
materiales y métodos
Pacientes
Este estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional del Centro Oncológico de Shanghái de la Universidad de Fudan (FUSCC) (IRB#090977-1) con el número de aprobación 2008223-9, y se llevó a cabo en una cohorte consecutiva de NSCLC que recibió resección quirúrgica o biopsia. en el Departamento de Cirugía Torácica y pruebas de PD-L1 en el Departamento de Patología en el Centro de Cáncer Fudan Shanghai desde septiembre de 2017 hasta abril de 2021. Se recolectaron prospectivamente los siguientes factores clinicopatológicos: edad, sexo, antecedentes de tabaquismo, tipo de muestra, histología del tumor, TNM estadio, diseminación tumoral a través del espacio aéreo (STAS) y alteraciones genéticas comunes. La distinción de cánceres de pulmón multifocales o metastásicos se basó en los criterios publicados por el Proyecto de estadificación del cáncer de pulmón de la IASLC. [6].
Prueba y evaluación de la expresión de PD-L1
La prueba de PD-L1 se realizó en muestras fijadas con formalina e incluidas en parafina (FFPE) dentro de la semana posterior a la cirugía. La IHC de PD-L1 se realizó mediante ensayos 22C3 (Agilent Technologies) utilizando la plataforma Dako Autostainer Link 48 siguiendo las instrucciones del fabricante. La puntuación de proporción tumoral (TPS) de la expresión de PD-L1 se definió como el porcentaje de células tumorales con tinción positiva de PD-L1 sobre todas las células tumorales. Se excluyeron las muestras que contenían menos de 100 células tumorales medibles. La expresión de PD-L1 se clasificó adicionalmente en ninguna expresión (TPS < 1 %), baja expresión (TPS: 1–49 %) y alta expresión (TPS ≥ 50 %). Los portaobjetos de las muestras fueron revisados por dos patólogos pulmonares experimentados (YJ e YL). Cualquier desacuerdo se resolvió mediante una nueva revisión y discusión hasta que se llegó a un acuerdo.
Pruebas de alteración genética mediante secuenciación de última generación
La secuenciación de próxima generación (NGS) de captura de destino se realizó con ADN genómico utilizando un panel de 68 genes (Burning Rock Inc., China). El ADN se extrajo utilizando el kit de tejido QIAamp DNA FFPE (QIAGEN, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante. El ADN se cortó con el instrumento Covaris M220 (Covaris Inc., Woburn, MA, EE. UU.), seguido de la reparación final y la ligadura del adaptador. Los fragmentos con un tamaño de 200 a 400 pb se seleccionaron con perlas y se hibridaron con cebos de sondas de captura. Después de la amplificación por reacción en cadena de la polimerasa, las bibliotecas se secuenciaron en la plataforma NextSeq N500 (Illumina, San Diego, EE. UU.). Los datos se analizaron más a fondo para identificar alteraciones genéticas (por ejemplo, EGFR mutación, KRAS mutación, ALK reordenamiento, ROS1 reordenamiento, TP53 mutación).
Análisis estadístico
Los datos fueron analizados por el software SPSS (versión 22.0, IBM Corp, Armonk, NY) y R (versión 3.6.0). Las correlaciones entre los factores patológicos y la expresión de PD-L1 se examinaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis. Se utilizó la estadística kappa ponderada con pesos cuadráticos para determinar la concordancia entre dos grupos. La estadística Kappa se clasificó adicionalmente de la siguiente manera: ≤ 0 = ninguno, 0,01–0,20 = deficiente, 0,21–0,40 = leve, 0,41–0,60 = aceptable, 0,61–0,80 = bueno, 0,81–0,92 = muy bueno, 0,93–1,00 = excelente [7, 8].
Resultados
Características de los pacientes y expresión de PD-L1
Se identificaron un total de 4550 pacientes según los criterios de inclusión. Entre ellos, 72 pacientes recibieron dos pruebas de expresión de PD-L1, incluidos 47 pacientes con dos lesiones resecadas quirúrgicamente (15 pacientes con segundo cáncer de pulmón primario y 32 pacientes con metástasis intrapulmonar), 12 pacientes con muestras pareadas de biopsia y resección quirúrgica, y 13 pacientes con dos muestras de biopsias para una lesión. Para los 4478 pacientes restantes, la mayoría (4320/4478, 96,5%) de ellos tenían muestras de resección quirúrgica analizadas, mientras que solo el 3,5% (158/4479) tenían muestras de biopsia analizadas.
De los 4550 pacientes, hubo proporciones iguales de hombres (51,6%) y mujeres (48,4%). 1.815 pacientes (39,9%) eran fumadores actuales o anteriores, mientras que el resto (60,1%) no lo eran. Había 3055…
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